液态活检和无创检测的出现导致许多新的游离DNA(cfDNA)检测方法的发展。

　　液态活检能够对在几滴血液或血浆中的DNA进行测序。与传统的活检不同，液态活检大部分是非侵入性的，是诊断或监测诸如癌症这类疾病的便利技术。

　　从生物体液(例如血液，血浆和尿液)中提取游离DNA是具有挑战性的，因为它们一般是含量较低且高度片段化的DNA。对于游离DNA的研究是为了能够鉴定非常低等位基因频率下的遗传变异，低至0.1%或更低，这对许多当前技术的检出限是一个挑战。

　　核酸结构变异(基因易位，融合，拷贝数变异和大范围的插入、缺失)的检测也具有挑战性，生物信息学流程的持续发展来促进结构变异的检测。在高度重复区域(富含GC或AT区)中检测SNV和小范围的插入、缺失是困难的，因为外显子和靶向捕获数据中的覆盖深度特别易受到GC偏差、捕获探针边界附近的不均匀覆盖以及其他系统偏差等的影响。

　　cfDNA性能分析

　　Horizon开发了参考标准品以支持包括NGS，ddPCR和qPCR在内的各种平台上对cfDNA工作流程的推进和持续评估。这些高通量平台为研究人员在对cfDNA样品进行分析时可提供更好的支持，然而在应用于生物标记物中的检测时，仍旧需要进一步考虑养样本的多样性以及平台差异性。

　　因此，有一个独立的质控是很重要的，使研究者能够保证研究的性能，包括检测的灵敏度、特异性以及游离DNA研究方法及平台的精确度。Horizon的参考标准品是为了满足这一需求而制定的。

　　cfDNA参考标准品

　　这些标准品由工程化的人类癌细胞系合成的，为游离DNA工作流程的评估提供稳定、可再生的资源。cfDNA标准品是由160bp左右的片段化核酸组成，类似于从人血浆中提取的cfDNA(参见图1)。

　　图1. 通过D1000 DNA ScreenTape法检测的cfDNA参考标准品的片段大小实例。

　　注意：以25bp为中心的左峰代表固有标准品，片段化的cfDNA标准品则由较大的右峰表示。

　　Horizon cfDNA参考标准品可用于多种混合物以解决特殊的测定挑战，包括在cfDNA检测中检测特异性的评估、检出限以及结构变异的检测等。

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