SmallRNA-SeqLibrary Prep Kit可提供简化的小RNA建库流程,可在5个小时内完成小RNA的建库流程(可从totalRNA或富集好的小RNA开始)。可用于小RNA的发现和分析,如microRNA或小干扰RNA,这些小RNA已被发现在基因表达调控中发挥关键作用。
优势:
5小时内即可完成测序文库的制备;
input量范围宽:从50pg(富集好的小RNA)或100ng(总RNA)到1000ngRNA;
适用于低RNA含量的样品,如血浆、血清和尿液;
内含i7index,最多可同时对96个样品进行处理;
含片选模块,无需切胶回收!
工作流程:
Small RNA文库构建是通过将接头连接到Total RNA或富集的small RNA的3 '和5 '端。对于input RNA,连接上5’端和3’端接头后,将反转录成cDNA,并通过PCR将i7端index引入到文库中,最多可以达96种index。通常情况下,特别是当input RNA为富集好的microRNA时,构建好的文库可直接用于测序分析。对于total RNA进行的small RNA文库构建,可以用试剂盒中带的磁珠纯化模块除去接头自连片段,以及将small RNA文库从total RNA文库中分离出来。
Figure 1 | small RNA建库流程
性能表现
与其他产品相比,Lexogen small RNA建库试剂盒检出miRNA能力超强,尤其在低起始量的时候(Fig.2)。高灵敏度使其高度适用于具有挑战性、低含量的RNA样本,如液体活检(血浆、血清和尿液)以及外泌体。此外本试剂盒重现性超强,不同的input量的结果也表现出超高的相关性(Fig.3)。
Figure 2 | Lexogen small R文N库A构建试剂盒可以检测到更多的miRNA,尤其是在RNA低input量的情况下。以血浆RNA为样本,input量分别为6pg,60pg以及600pg,用4种不同试剂盒进行文库构建,对所得到的文库进行测序,每个样本获得相同的reads数约1.5 -2 M,比较4种试剂盒检测到的总miRNA数量。在≥5个原始reads水平下,Lexogen small RNA-S文eq库构建试剂盒检测到更多的miRNA,尤其是在input量较低的情况下。
Figure 3 | A)组内重复结果高度相关。以Input 量为60 pg 和600 pg血浆RNA进行建库,结果显示两者组内的RPM(Reads per Million)高度相关。B)不同input量之间结果高度相关。以Input 量为60 pg 和600 pg的血浆RNA进行建库,两者之间small RNA的表达量高度相关。
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