CORALL试剂盒可以在4.5h内快速完成单分子标签（UMIs）以及链特异性(>99%)的RNA文库构建。Lexogen专有的链置换终止和连接技术，无需片段化，可提供完整的转录表达信息，包括转录的起始和终止位点信息。

产品优势：

完整覆盖转录本信息，从起始到终止位点信息，用于全转录组分析；

4.5小时内即可完成RNA文库构建；

整合UMIs，准确反映转录本信息；

出色的链特异性（>99 %）操作流程；

低起始量（1ng-1μg），兼容mRNA捕获及核糖体去除建库；

适用低起始量或低质量的FFPE样本；

自动化友好。

工作流程：
CORALL文库构建基于特有的链置换终止和连接技术，首先置换终止引物(DSP，包含P7序列)3’端可随机结合到RNA模板上，然后进行反转录延伸，当延伸到下一个DSP时，延伸终止，因此文库构建过程不需要进行片段化。插入片段的大小取决于两个结合到模板RNA上DSP的距离。此外，这种终止可阻止伪第二链的合成，保持出色的链特异性。寡核苷酸连接序列可以与第一链cDNA片段的3’端进行高效的连接,同时引入P5序列和单分子标签（UMIs）。

通过PCR进行第二链的合成和双链cDNA扩增，同时把i7和i5（可选）端index以及簇生成所需的完整接头序列引入到文库中。所有的核酸纯化都使用磁珠，操作流程高度匹配自动化。
CORALL试剂盒中已包含多达96个i7 index 可用于多样本混合分析。此外，还可以选购i5 index以得到9,216种不同的index组合(Lexogen i5 6 nt DualIndexing Add-on Kits)。由于UMI信息包含在Read 1中，因此可以直接以低成本对转录本进行唯一分析，可进行精确定量。

性能表现：
CORALL试剂盒表现出非常好的覆盖率、链特异性、ERCC input-output线性关系及序列比对率(Tab.1)。CORALL在多种物种及样本类型中都表现出很好的性能，包括人、小鼠、小型猪、仓鼠、植物和细菌的各种RNA，以及降解的和FFPE RNA样本。

Table 1 | CORALL文库双端比对数据。以~2ng去除rRNA的UHRR(通用的人类参考RNA)进行建库，并在NextSeq 500平台进行测序)PE 150)。将测序数据比对到人类参考基因组GRCG38.94并用Mix2 Sequencing Library Read 1（version1.4.0.12）软件进行定量分析。
aCoD覆盖率为实际覆盖率与理论覆盖率的偏差(值越低表示偏差越小)。编码蛋白质、反义+ lincRNA的百分比是通过featureCounts、进行计算。

转录本覆盖度：
与竞品T和N相比，CORALL生成的转录组覆盖度与其相当，比较平滑、均一 (Fig. 2)。

Figure 2 | 转录本累积覆盖度（全转录组）。使用RSeQC提供的geneBody_cover.py生成所有转录本的覆盖率（转录本长度标准为100%）。

基因检测数量
CORALL试剂盒的基因检出率与传统竞品试剂盒相比性能相当(Fig. 3A)。95%的基因都可以被CORALL和其他两个竞品试剂盒检测到（at >10 counts per million (CPM), Fig. 3B）。这种高度多样性的文库可确保对转录组的真实反应，提高基因表达分析的灵敏度。

Figure 3 | 基因检测数量。 A）基因发现率，检测到的基因数量与唯一比对到外显子的reads总数相对应。B）基因发现重叠情况，韦恩图显示CORALL和竞品试剂盒检测到的基因的重叠情况（以>10 CPM作为表达水平标准）。

超高的End-to-End覆盖度

CORALL全面的覆盖度可提高转录本起始位点和终止位点的覆盖率。ERCC标准品具有精确、已知的转录起始(TSS)和终止位点(TES)信息，因此使用ERCC作为spike-in标准品来分析覆盖度。与竞品文库相比， CORALL的文库序列能更精确地比对到ERCC的TSS (Fig. 4A)。另外，CORALL也提高TES的覆盖度 (Fig. 4B)。

Figure 4 | 标准化的ERCC覆盖率 A）TSS，B）TES。ERCCs reads的累积标准化覆盖率。图中显示了与TSS(红色虚线，A)和TES(蓝色虚线，B)相应的绝对核苷酸位置.

应用
CORALL适用于全转录组测序应用，包括基因表达谱分析，isoform发现和定量分析，可变剪切研究，转录本注释，和重新组装。CORALL同样可以用于SLAMseq代谢组分析。

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